生命科學(xué)研究中，精準(zhǔn)的核酸與蛋白定量至關(guān)重要。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計憑借其獨(dú)特的熒光檢測原理，為核酸與蛋白定量提供了高靈敏度、高特異性且操作簡便的解決方案。

在生命科學(xué)研究的廣闊領(lǐng)域中，從基礎(chǔ)的基因表達(dá)研究、蛋白質(zhì)功能探索，到前沿的基因治療、個性化醫(yī)療等應(yīng)用，準(zhǔn)確測定核酸與蛋白質(zhì)的含量是開展各項實驗的基石。核酸作為遺傳信息的攜帶者，其濃度與純度的精確測定對于基因克隆、PCR 擴(kuò)增、下一代測序（NGS）等技術(shù)的成功實施起著決定性作用；蛋白質(zhì)則是生命活動的主要執(zhí)行者，蛋白質(zhì)定量是蛋白質(zhì)組學(xué)研究、細(xì)胞生物學(xué)實驗以及生物制藥工藝開發(fā)中不可或缺的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的核酸與蛋白定量方法，如紫外分光光度法，雖應(yīng)用廣泛，但在靈敏度、特異性以及對復(fù)雜樣品的耐受性等方面存在一定局限性。隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步，熒光檢測技術(shù)因其卓越的靈敏度和特異性，逐漸成為核酸與蛋白定量的主流方法之一。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計作為該領(lǐng)域的先進(jìn)儀器，以其創(chuàng)新的設(shè)計和出色的性能，為生命科學(xué)研究帶來了更為高效、精準(zhǔn)的定量手段，在眾多研究場景中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

一、在核酸定量中的應(yīng)用

（一）NGS文庫構(gòu)建中的DNA含量測定

在下一代測序（NGS）技術(shù)流程中，準(zhǔn)確測定文庫中DNA的含量是保證測序質(zhì)量和數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵步驟。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計能夠精確測定NGS文庫中dsDNA的濃度，為文庫的定量和均一化提供可靠依據(jù)。通過使用dsDNA高靈敏度試劑盒，可檢測文庫中低濃度的DNA片段，確保在文庫混合和測序過程中，每個文庫都能以合適的比例進(jìn)行測序，避免因文庫濃度不準(zhǔn)確導(dǎo)致的測序偏差和數(shù)據(jù)浪費(fèi)。研究表明，使用博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計進(jìn)行NGS文庫定量，能夠有效提高測序數(shù)據(jù)的均一性和覆蓋度，使測序結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠，為深入研究基因組結(jié)構(gòu)和功能提供有力支持。

（二）PCR實驗中核酸濃度檢測

PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是生命科學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的技術(shù)，而準(zhǔn)確的核酸模板濃度對于 PCR 反應(yīng)的成功至關(guān)重要。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計可用于PCR實驗前對模板DNA或RNA的濃度測定。在常規(guī)PCR中，準(zhǔn)確知道模板DNA的濃度，能夠優(yōu)化PCR反應(yīng)體系，調(diào)整引物、酶、dNTP等反應(yīng)成分的用量，提高PCR擴(kuò)增的效率和特異性，減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生。在實時熒光定量PCR（qPCR）中，精確測定起始核酸模板的濃度是定量分析基因表達(dá)水平的基礎(chǔ)。通過使用博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計對RNA進(jìn)行準(zhǔn)確的定量，并將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后，再進(jìn)行qPCR分析，能夠更準(zhǔn)確地反映基因的表達(dá)差異，為基因功能研究、疾病診斷等領(lǐng)域提供可靠的數(shù)據(jù)支持。

（三）不同類型核酸樣品的定量分析

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計能夠?qū)Χ喾N不同類型的核酸樣品進(jìn)行特異性定量分析。除了常見的dsDNA和RNA，對于單鏈DNA（ssDNA）、微小RNA（miRNA）等特殊類型的核酸也能準(zhǔn)確測定其濃度。在研究ssDNA病毒的基因組含量、核酸適配體的濃度，以及在miRNA相關(guān)的疾病診斷和功能研究中，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計都發(fā)揮著重要作用。例如，在miRNA的定量分析中，使用專門的miRNA定量試劑盒，結(jié)合博清生物熒光計的高靈敏度和高特異性檢測能力，能夠準(zhǔn)確測定樣品中低豐度的miRNA含量，為深入了解miRNA在細(xì)胞生理病理過程中的調(diào)控機(jī)制提供關(guān)鍵數(shù)據(jù)。

二、在蛋白定量中的應(yīng)用

（一）蛋白質(zhì)純化過程中的濃度監(jiān)測

在蛋白質(zhì)純化過程中，需要實時監(jiān)測蛋白質(zhì)的濃度，以評估純化效果和確定最佳的收集時間點。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計可方便快捷地對蛋白質(zhì)純化過程中的各個餾分進(jìn)行濃度測定。在親和層析、離子交換層析等純化方法中，通過檢測不同洗脫餾分中的蛋白質(zhì)濃度，能夠準(zhǔn)確判斷目標(biāo)蛋白質(zhì)的洗脫峰位置，從而收集到高純度、高濃度的目標(biāo)蛋白質(zhì)。同時，在蛋白質(zhì)濃縮步驟中，使用博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計監(jiān)測蛋白質(zhì)濃度的變化，可確保蛋白質(zhì)在濃縮過程中既達(dá)到所需的濃度，又避免因過度濃縮導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集或變性，為后續(xù)的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究提供高質(zhì)量的蛋白質(zhì)樣品。

（二）細(xì)胞生物學(xué)研究中的蛋白質(zhì)定量

在細(xì)胞生物學(xué)研究中，準(zhǔn)確測定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的含量對于了解細(xì)胞的生理狀態(tài)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑以及疾病發(fā)生機(jī)制等方面具有重要意義。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計可用于測定細(xì)胞裂解液中的蛋白質(zhì)濃度，為細(xì)胞生物學(xué)實驗提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。在研究細(xì)胞增殖、分化、凋亡等過程中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化時，通過對不同處理組細(xì)胞裂解液中的蛋白質(zhì)進(jìn)行定量分析，能夠直觀地反映出蛋白質(zhì)表達(dá)量的差異，進(jìn)而深入探究相關(guān)的分子機(jī)制。此外，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗中，準(zhǔn)確測定轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)目的蛋白質(zhì)的濃度，有助于評估轉(zhuǎn)染效率和目的基因的表達(dá)效果，為基因功能研究和基因治療等領(lǐng)域的實驗優(yōu)化提供依據(jù)。

（三）蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的應(yīng)用

蛋白質(zhì)組學(xué)旨在全面研究生物體或細(xì)胞內(nèi)所有蛋白質(zhì)的表達(dá)、修飾、相互作用等信息。在蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，樣品的制備和蛋白質(zhì)定量是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計能夠?qū)Φ鞍踪|(zhì)組學(xué)樣品中的蛋白質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確的定量，為后續(xù)的蛋白質(zhì)分離、鑒定和分析提供可靠的起始數(shù)據(jù)。在二維凝膠電泳（2-DE）實驗前，使用博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計對蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行定量，可確保在凝膠上加載相同量的蛋白質(zhì)，使不同樣品之間的蛋白質(zhì)表達(dá)差異能夠準(zhǔn)確地反映在凝膠圖譜上，便于后續(xù)的蛋白質(zhì)點分析和鑒定。在基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)研究中，準(zhǔn)確的蛋白質(zhì)定量有助于優(yōu)化質(zhì)譜分析條件，提高蛋白質(zhì)鑒定的準(zhǔn)確性和靈敏度，從而更全面地揭示蛋白質(zhì)組的組成和功能。

三、實驗數(shù)據(jù)對比

（一）與傳統(tǒng)紫外分光光度法的對比

為了進(jìn)一步驗證博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計在核酸與蛋白定量方面的優(yōu)勢，進(jìn)行了與傳統(tǒng)紫外分光光度法的對比實驗。在核酸定量實驗中，選取一系列不同濃度的dsDNA樣品，分別使用博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計（搭配dsDNA高靈敏度試劑盒）和紫外分光光度計進(jìn)行濃度測定。結(jié)果顯示，對于低濃度（＜10ng/ml）的dsDNA樣品，紫外分光光度計的檢測結(jié)果誤差較大，變異系數(shù)（CV）可達(dá)20%以上，而博清生物熒光計的檢測結(jié)果變異系數(shù)小于5%，準(zhǔn)確性和重復(fù)性明顯優(yōu)于紫外分光光度計。在高濃度（＞500ng/ml）樣品檢測中，雖然兩者都能給出相對準(zhǔn)確的結(jié)果，但博清生物熒光計的檢測速度更快，且不受樣品中雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)、游離核苷酸等）的干擾。在蛋白質(zhì)定量實驗中，以BSA為標(biāo)準(zhǔn)蛋白，制備不同濃度的蛋白質(zhì)樣品，分別用博清生物熒光計（使用Portelite? Fluorimetric Protein Quantitation Kit）和傳統(tǒng)的Bradford法進(jìn)行測定。結(jié)果表明，博清生物熒光計在低濃度（＜50μg/ml）蛋白質(zhì)檢測中，靈敏度比Bradford法提高了約10倍，能夠檢測到更低濃度的蛋白質(zhì)，且檢測線性范圍更寬，能夠更準(zhǔn)確地測定蛋白質(zhì)濃度。

（二）不同品牌熒光計之間的性能對比

在同類熒光計性能對比實驗中，選取了市場上另一款知名品牌的熒光計與博清生物熒光計進(jìn)行比較。在核酸檢測方面，對一系列不同類型和濃度的核酸樣品（包括dsDNA、ssDNA、RNA）進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，博清生物熒光計在檢測靈敏度和特異性上與競品相當(dāng)，但在檢測速度上具有明顯優(yōu)勢，博清生物熒光計平均每個樣品的檢測時間為3秒，而競品需要5-7秒。在蛋白質(zhì)檢測中，使用相同的蛋白質(zhì)定量試劑盒對不同濃度的蛋白質(zhì)樣品進(jìn)行測定，博清生物熒光計的檢測線性范圍更寬，對于高濃度蛋白質(zhì)樣品的檢測準(zhǔn)確性更高，且在多次重復(fù)檢測中，博清生物熒光計的結(jié)果變異系數(shù)更小，穩(wěn)定性更好。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計作為一款先進(jìn)的生命科學(xué)研究工具，憑借其基于熒光檢測原理的獨(dú)特設(shè)計，在核酸與蛋白定量領(lǐng)域展現(xiàn)出高靈敏度、寬檢測范圍、高特異性、快速檢測以及樣品量需求少等諸多顯著優(yōu)勢。在核酸定量方面，廣泛應(yīng)用于NGS文庫構(gòu)建、PCR實驗以及各種類型核酸樣品的分析，為基因組學(xué)研究提供了精準(zhǔn)的數(shù)據(jù)支持；在蛋白定量中，在蛋白質(zhì)純化、細(xì)胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等研究領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用，助力深入探究蛋白質(zhì)的功能和作用機(jī)制。通過與傳統(tǒng)方法及同類產(chǎn)品的實驗數(shù)據(jù)對比，進(jìn)一步凸顯了其在性能上的優(yōu)越性。隨著生命科學(xué)研究的不斷深入和技術(shù)的持續(xù)發(fā)展，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計有望在更多前沿研究領(lǐng)域，如單細(xì)胞分析、精準(zhǔn)醫(yī)療等方面發(fā)揮更大的作用，為推動生命科學(xué)研究的進(jìn)步做出重要貢獻(xiàn)，成為生命科學(xué)研究人員不可或缺的得力工具。